APLIKASI PCR DALAM FORENSIK

Mimi kusmiati, Siti Sarikah, Suci Hermiatun Hasanah

KARAKTERISASI, PENGAMBILAN DAN PENYIMPANAN BAHAN BIOLOGIS

Dalam menentukan sebab kematian, harus dilakukan otopsi. Namun, tidak selalu pada suatu otopsi dokter dapat menentukan sebab kematian korban. Untuk itu pemeriksaan tambahan juga dibutuhkan dalam hal mencari dan mengumpulkan barang bukti lain, baik yang berasal dari tubuh pasien maupun disekitarnya.

Barang bukti adalah bukti fisik yang secara umum disebutkan sebagai sejumlah material baik dalam jumlah banyak atau sedikit yang dibuktikan melalui pemeriksaan yang ilmiah dan analisis berkaitan tindak pidana telah terjadi (Kiely,2002).

Tujuan pemeriksaan barang bukti :

 Menegakkan diagnosis sebab kematian

 Mengkonfirmasi temuan makroskopis

 Memberi gambaran histomorfologi perjalanan penyakit

 Gambaran intravitalitas

 Menentukan umur secara histomorphologi (infark lama/baru, umur luka, dan lain-lain)

Tujuan pemeriksaan barang bukti secara khusus untuk mengetahui :

 Kematian mendadak

 Aborsi

 Hanging-chocking-throttling (asphyxia)

 Tenggelam

 Trauma thermik

 Trauma listrik

 Luka tembak

 Keracunan

Berikut akan diuraikan mengenai cara pegambilan, pengawetan serta pengiriman barang bukti untuk pemeriksaan tambahan yang mencakup pemeriksaan histopatologi, toksikologi dan analisis DNA.

1 Pengumpulan bahan biologis, karakterisasi dan penyimpanan

Sensitivitas dan daya bukti dari profil DNA telah berdampak pada cara yang TKP selidiki. Karena hanya beberapa sel yang diperlukan untuk profiling DNA, pemeriksa kejadian kejahatan sekarang memiliki jauh lebih luas dari bukti biologis untuk mengumpulkan dan juga memiliki kesempatan lebih besar untuk kontaminan TKP dengan DNA sendiri.

2 Sumber biologis

Bukti tubuh manusia terdiri triliunan sel dan hampir semua mengandung inti, kecuali sel darah merah. Berbagai bahan seluler dapat pulih dari kejahatan. Setiap sel bernukleus berisi dua salinan individu genom dan dapat digunakan, dalam teori, untuk menghasilkan profil DNA di bawah kondisi optimal. Dalam praktiknya, 15 atau lebih sel diperlukan secara konsisten untuk menghasilkan profil DNA yang berkualitas dari bahan segar. Sampel forensik biasanya menunjukkan beberapa hal dengan tingkat yang lebih tinggi, beberapa bahan selular dibutuhkan untuk menghasilkan profil DNA. Jika bahan ini sangat tinggi maka rusak, bahkan dengan pengujian DNA sensitivitas tinggi, itu tidak mungkin untuk menghasilkan profil DNA . Bahan biologi paling sering ditemui di kejadian kejahatan adalah darah. Hal ini karena kekerasan alam dan banyak kejahatan, dan juga karena lebih mudah untuk visualisasi daripada bahan biologi lain seperti air liur.

Sampel lainnya yg sering ditemui termasuk cairan mani sangat penting dalam kasus-kasus kekerasan seksual; air liur yang dapat ditemukan pada sesuatu yg menempel di mulut, seperti puntung rokok dan botol minuman, atau pada bekas gigitan; dan sel-sel epitel disimpan misalnya, sebagai ketombe dan kotoran. Dengan peningkatan sensitivitas profil DNA pemulihan DNA dari sel-sel epitel yang menyentuh juga mungkin terjadi. Gudang rambutnya secara alami, juga dapat ditarik keluar melalui kontak fisik dan dapat pulih dari kejahatan adegan. Secara alami gudang rambut cenderung tidak punya banyak folikel terpasang dan bukan sumber yang baik dari DNA , padahal petikan rambut atau rambut dihapus akibat tindakan fisik seringkali memiliki akar terpasang , yang merupakan sebuah sumber bahan selular yang kaya. Empat jenis sel berinti paling umum yang diperoleh dari kejadian kejahatan adalah sel darah putih , spermatozoa , sel-sel epitel dan folikel rambut.

Tabel 3.1 Jenis bahan biologis yang dapat diperoleh dari TKP. Profil DNA yang dihasilkan dari bahan TKP dibandingkan terhadap profil referensi yang diberikan oleh tersangka, dan dalam beberapa kasus, korban.

Gambar 3.1 Darah merupakan bentuk paling umum biologis bahan yang pulih dari kejahatan adegan . (a) besar volume darah dapat dilakukan menggunakan lap, jika darah cair kemudian jarum suntik atau pipet dapat digunakan (gambar yang diberikan oleh allan scott, universitas pusat lancashire). (b) darah pada pakaian biasanya dikumpulkan oleh swabbing , atau memotong gangguan (gambar yang diberikan oleh elizabeth) wilson (lihat bidang piring full-colour versi angka ini).

Gambar 3.2 jenis sel umum yang diperoleh dari adegan kejahatan: ( a ) sel darah putih; ( b ) spermatozoa; ( c ) sel epitel ( dari air liur ); ( d ) sebuah batang rambut dengan folikel terpasang ( sel-sel telah ternoda dengan haematoxylin dan eosin )

2.3 Pengumpulan dan penanganan bahan pada tempat kejadian kriminal

Tingginya tingkat sensitivitas yang membuat alat forensik DNA profiling berharga juga dapat menjadi kerugian potensial. Kontaminasi bahan bukti dengan bahan biologis dari sumber lain, seperti polisi mengikuti atau kejadian petugas kejahatan, adalah kemungkinan yang sangat nyata. Sangat penting bahwa perawatan yang tepat diambil, seperti menjaga integritas kejadian dan mengenakan pakaian pelindung lengkap dan masker wajah selama penyelidikan dari kejadian (Gambar 3.3). Penanganan yang tidak tepat dari bukti dapat memiliki konsekuensi serius. Dalam kasus terburuk, dapat menyebabkan kontaminasi silang, menyebabkan degradasi sampel, dan mencegah atau membingungkan interpretasi bukti.

2.4 Identifikasi dan karakterisasi bukti biologis

Mencari bahan biologis, baik di TKP dan di laboratorium forensik dilakukan terutama oleh mata. Di laboratorium, daya rendah mencari dengan mikroskop dapat membantu pelokalan noda maupun kontak tanda. Alternatif sumber cahaya telah ditemukan untuk membantu menemukan biologis bahan baik di lapangan dan di laboratorium. Sel epitel, air liur dan semen dapat berpendar noda dengan perbedaan gelombang cahaya dibandingkan dengan latar belakang substrate dan karena itu menjadi terlihat. Berbagai sumber cahaya tersedia dan ini dapat tetap beroperasi panjang gelombang atau sejumlah variabel panjang gelombang yang akan cocok untuk mendeteksi berbagai jenis noda .

Mencari lokasi kejadian atau barang diperoleh dari lokasi kejadian untuk darah dapat dibantu oleh penggunaan luminol (3-aminophthalhydrazide). Kimia tersebut dapat menyerang ke wilayah yang luas nanti menjadi teroksidasi dan bercahaya di sisi hemoglobin, yang ditemukan dalam sel darah merah. Perlu dapat untuk menggelapkan wilayah yang sedang dicari agar luminescence dapat dideteksi. Luminol juga dapat digunakan dalam lebih tertib lingkungan ahli forensik laboratorium dan dapat terutama berguna ketika mencari pakaian untuk jumlah kecil darah .

Keberhasilan dalam menemukan bahan biologis tergantung pada metode pencarian digunakan dan juga pada integritas dan negara lokasi kejadian .Di inggris, bahan biologis ditemukan disekitar 12% dari kejadian kejahatan penyelidikan, angka ini dapat naik secara signifikan jika kejahatan kejadian yang mendalam.

2.5 Bukti pengumpulan

Metode yang digunakan untuk pengumpulan akan bervariasi tergantung pada jenis sampel. Noda kering dan tanda kontak pada item bergerak besar biasanya dikumpulkan dengan menggunakan swab steril yang sudah dibasahi dengan air suling; dalam kasus lain, menggores atau memotong bahan mungkin lebih tepat. Mengangkat dari permukaan menggunakan kualitas tinggi pita perekat adalah metode alternatif untuk mengumpulkan sel epitel. Cairan darah dapat dikumpulkan dengan menggunakan jarum suntik atau pipet dan dipindahkan ke tabung penyimpanan steril bersih yang berisi antikoagulan (EDTA), atau dengan menggunakan swab atau sepotong kain untuk menyerap noda, yang harus dikeringkan dengan udara untuk mencegah aktivitas mikroba. cairan darah juga dapat diterapkan untuk kertas FTAR yang diresapi dengan bahan kimia untuk mencegah aksi agen mikroba dan menstabilkan DNA.

Benda bergerak yang lebih kecil, seperti senjata, yang mungkin berisi bahan biologis yang dikemas di TKP dan diperiksa dalam lingkungan yang terkendali dari laboratorium forensik. Kisaran yang sama dari swabbing, menggores dan mengangkat teknik seperti yang digunakan di lapangan dapat digunakan untuk mengumpulkan bahan biologis. Pakaian diambil dari tersangka dan korban menyajikan sumber penting dari bukti biologis. Ini juga dianalisis dalam laboratorium biologi forensik di mana noda dan area kontak dapat direkam dan kemudian dipotong atau diusap.

2.6 Kekerasan Seksual dan Fisik

Berikut ini kekerasan seksual korban harus diperiksa segera setelah terjadi. Semen ditemukan oleh pemeriksa medis yang terlatih menggunakan penyeka standar; kerokan kuku dapat dikumpulkan dengan menggunakan berbagai penyeka; rambut dari kemaluan dan rambut kepala biasanya disimpan dalam amplop kertas. Kontak tanda, misalnya memar yang disebabkan oleh mencengkeram atau bekas gigitan, dapat diusap untuk DNA. Jenis bukti yang sama (kecuali air mani) dapat diambil setelah kasus kekerasan fisik

2.7 Pengujian Dugaan

Mengidentifikasi titik merah di dinding atau noda putih pada sprei mungkin menunjukkan adanya darah atau air mani. Berbagai tes dugaan yang tersedia yang membantu identifikasi tiga cairan tubuh utama yang dihadapi; darah, air mani dan air liur. Idealnya tes dugaan harus aman, murah, mudah untuk melaksanakan, menggunakan jumlah yang sangat kecil dari sampel, dan memberikan indikasi sederhana dari ada atau tidak adanya cairan tubuh. Tes dugaan seharusnya tidak berpengaruh negatif pada profil DNA. Selain membantu untuk mencari bahan untuk analisis DNA, noda karakterisasi juga dapat memberikan pembuktian dan tidak langsung bukti penting.

a. Darah

Tes ini digunakan untuk mendeteksi keberadaan dugaan pengambilan aktivitas peroksidase kelebihan darah heme kelompok berlimpah sebagai bagian dari molekul hemoglobin dalam sel darah merah - bisa menjadi sebanyak 5 juta sel darah merah dalam satu mililiter darah. Selain luminol, dua dugaan utama tes yang tersedia untuk darah dan mereka bekerja dengan cara yang sama. Kelompok haem dapat dideteksi dengan menggunakan pewarna berwarna berkurang Kastle-Meyer (KM) dan leuco-perunggu hijau (LMG). Jika haem hadir substrat berwarna teroksidasi dengan adanya hidrogen peroksida dan menjadi berwarna. Dalam kasus KM berkembang ungu, dan ketika LMG menggunakan warna hijau berkembang [13, 14]. Satu tes darah harus dianggap sebagai dugaan uji dan tidak mengkonfirmasi adanya darah untuk senyawa alami lainnya, seperti ekstrak tumbuhan, kopi dan beberapa cairan pembersih, dapat menghasilkan perubahan warna yang sama atau reaksi ringan, sehingga mengurangi spesifisitas reaksi.

b. Air Mani

Identifikasi positif dari air mani bisa menjadi bukti yang sangat penting untuk mendukung dugaan kekerasan seksual dan kedua tes dugaan dan definitif digunakan. Sebuah tes sederhana melibatkan pengujian untuk kehadiran enzim asam fosfatase mani yang hadir dalam konsentrasi tinggi dalam cairan mani. cairan tubuh lain, seperti air liur dan cairan vagina, mengandung enzim meskipun dalam konsentrasi yang jauh lebih rendah sehingga dapat memberikan hasil positif. penanda lain untuk identifikasi semen adalah P30 protein yang merupakan antigen spesifik prostat (PSA). Keuntungan menggunakan PSA dibandingkan dengan reaksi yang melibatkan asam fosfatase adalah bahwa PSA diproduksi secara independen dari generasi sperma dan karena itu dapat digunakan untuk kedua sampel spermic dan azoospermia. Sebuah tes definitif untuk semen melibatkan pengobatan dengan pewarna yang noda spermatozoa dan memungkinkan mereka untuk divisualisasikan menggunakan mikroskop daya tinggi; pewarna yang biasa digunakan termasuk hematoksilin-eosin (Gambar 3.2b) dan pohon Natal noda.

c. Air liur

Air liur adalah cairan yang dihasilkan dalam mulut untuk membantu dalam menelan dan tahap awal pencernaan. Orang yang sehat menghasilkan antara 1 dan 1,5 liter air liur setiap hari dan dapat mentransfer air liur, bersama dengan sel-sel epitel terkelupas dari rongga bukal, dalam beberapa cara. Transfer mungkin melalui kontak; seperti pada produk makanan saat makan, kapal, puntung rokok, amplop atau di serangan seksual lisan minum. Transfer juga mungkin oleh deposisi udara air liur seperti pada bagian depan masker ketika dikenakan di atas kepala atau ke telepon ketika berbicara ke bagian mulut. tes dugaan untuk air liur memanfaatkan enzim α-amilase yang hadir pada konsentrasi tinggi dan mencerna pati dan gula kompleks. Pencernaan pati dapat diukur dengan pelepasan zat warna yang telah kovalen terkait dengan molekul pati tidak larut [13]. Pelepasan pewarna menyebabkan perubahan warna yang dapat dengan mudah dideteksi. Amilase yang hadir dalam cairan tubuh lain seperti keringat, cairan vagina, ASI dan sekresi pankreas; Namun amilase hadir dalam air liur pada konsentrasi yang lebih besar dari 50 kali dalam cairan tubuh lainnya.

d. Sel epitel

Ketika sebuah benda disentuh, sel-sel epitel dapat disimpan. Jumlah bahan selular ditransfer tergantung pada jumlah waktu kulit bersentuhan dengan obyek; jumlah tekanan diterapkan; dan adanya cairan seperti keringat untuk menengahi transfer. Beberapa orang mentransfer sel kulit mereka lebih mudah daripada yang lain; orang-orang ini diklasifikasikan sebagai penumpah baik. Bahan ini dapat dikumpulkan dari bukti materi oleh swabbing atau dengan pita angkat. Permukaan bahwa pelaku dari kejahatan cenderung memiliki kontak dengan termasuk gagang pintu, ujung ligatures, pegangan senjata dan tanda kontak pada korban. Ini semua adalah sumber potensial dari sel epitel. Dalam kebanyakan kasus jumlah sel sangat rendah dan tingkat keberhasilan profiling DNA terbatas. Skrining metode, misalnya menggunakan ninhidrin reagen, yang mendeteksi keberadaan asam amino (dan secara rutin digunakan untuk mengembangkan sidik jari laten), dapat membantu dalam mengidentifikasi sampel yang mungkin mengandung sel-sel epitel.

e. Sampel rujukan

Untuk mengidentifikasi sampel diperoleh dari lokasi kejadian, sampel rujukan yang diperlukan untuk perbandingan. sampel rujukan disediakan oleh tersangka dan, dalam beberapa kasus, seorang korban. Secara tradisional, sampel darah telah diambil dan ini memberikan banyak suplai DNA; Namun, mereka invasif dan sampel darah adalah bahaya kesehatan potensial. Buccal swabs yang dioleskan pada permukaan bagian dalam dari pipi untuk mengumpulkan bahan selular telah menggantikan sampel darah dalam banyak skenario. Dalam beberapa keadaan rambut dicabut dapat digunakan tetapi sumber ini bahan yang tidak umum digunakan.

FTAR® cards dapat digunakan untuk menyimpan baik bukal dan sampel darah. FTAR® card adalah kertas berbasis selulosa yang diresapi dengan bahan kimia yang menyebabkan bahan selular untuk membuka - DNA dilepaskan dan mengikat ke kartu. Bahan kimia pada kartu juga menghambat setiap pertumbuhan bakteri atau jamur dan DNA dapat stabil disimpan pada FTAR® card selama bertahun-tahun pada suhu kamar selama kartu tetap kering.

2.8 Penyimpanan bahan biologis

Bahan biologis dikumpulkan untuk analisis DNA harus disimpan dalam kondisi yang akan memperlambat laju degradasi DNA, dalam suhu rendah tertentu dan kelembaban rendah. Sebuah lingkungan yang sejuk dan kering membatasi aksi bakteri dan jamur yang menemukan bahan biologis kaya akan sumber makanan dan secara cepat dapat mendegradasi bahan biologis.

Kondisi yang tepat tergantung pada sifat dari sampel dan lingkungan di

yang sampel harus disimpan. Buccal swabs dan swabs digunakan untuk mengumpulkan bahan di TKP dapat disimpan dalam lemari pendingin untuk jangka pendek dan baik dibekukan secara langsung atau kering dan kemudian disimpan pada suhu -20 0C untuk penyimpanan jangka panjang. sampel darah biasanya akan disimpan di antara -20 0C dan -70 0C. sampel bukal dan darah dikumpulkan menggunakan FTAR® card dapat disimpan selama bertahun-tahun pada suhu kamar. Beberapa barang bukti, seperti pakaian, dapat disimpan di ruangan yang kering dan sejuk; di daerah suhu dari dunia DNA telah dipulihkan dari bahan yang disimpan dalam suhu kamar selama beberapa tahun[9]. Ketika sampel tidak beku, misalnya pakaian, mereka disimpan dalam kertas bebas asam daripada kantong plastik, untuk meminimalkan penumpukan kelembaban apapun. Setelah DNA telah diekstraksi dari sampel, DNA dapat disimpan jangka pendek pada 4 0C tetapi harus disimpan pada suhu -20 0C dan -70 0C untuk penyimpanan jangka panjang.

Gambar 3.4 kartu FTA dapat digunakan untuk menyimpan darah dan sel-sel bukal. Bahan seluler lisis jika berkontak dengan kartu. DNA mengikat kartu dan stabil selama bertahun-tahun pada suhu kamar.

DAFTAR PUSTAKA

Goodwin,W., Linacre, A., Hadi, S. 2007. An Introduction To Forensic Genetics. England : WILEY